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              Empore™ C18固相萃取膜片应用于自来水中微囊藻毒素的检测

              2022-04-15 [97]
               关键词:

              微囊藻毒素MCEmpore47mm固相萃取膜

               

              前言

              微囊藻毒素Microcystin,MC)是一类具有生物活性的,自然环境中广泛分布的肝毒素。它对人体蛋白磷酸酶1 和蛋白磷酸酶2A 具有抑制作用,与肿瘤促进作用有直接关系。中国生活饮用水卫生标准(GB/T 5749-2006),将饮用水中微囊藻毒素含量限制为1.0μg/L,该标准的实施对水源水的质量提出了更高的要求[1]

              实验中,采用1升水样通过47mm的Empore™ C18固相萃取膜片货号:98-0604-0217-3处理,并用0.1%三氟乙酸的甲醇溶液洗脱。然后通过HPLC对提取物进行定量[2]。

              1, 实验过程

              1.1 仪器与试剂 

              所有试剂均为分析纯或更高。

              微囊藻毒素-LR标准物质(农业部环境保护科研监测所,20μg/mL,溶剂:甲醇);

              EmporeTM 固相萃取膜:C1847mm购自美国CDS公司货号:98-0604-0217-3);

              甲醇(色谱纯, Fisher Chemical)

              三氟乙酸(分析纯,天津市福晨化学试剂厂)

              磷酸二氢钾(分析纯,北京化学试剂公司)

              磷酸(分析纯,国药集团化学试剂公司)

              纯净,产自Milli-Q® EQ 7000系统,美国密理博Millipore公司

              磷酸二氢钾溶液(0.05mol/L):称取6.8g磷酸二氢钾,用水溶解,定容至1000.0mL

              磷酸盐缓冲液:用20%(体积分数)磷酸溶液将磷酸二氢钾溶液调至pH到3

              0.1%三氟乙酸-甲醇溶液:用甲醇将0.1mL三氟乙酸定容至100.0mL

              Sepaths UP 柱膜通用全自动固相萃取系统,北京莱伯泰科仪器股份有限公司;

              高效液相色谱仪:LC600 二元高压梯度高效液相色谱,北京莱伯泰科仪器股份有限公司

              1.2 工作液配制 

              微囊藻毒素-LR工作液:将20μg/mL微囊藻毒素-LR标准物质用甲醇稀释至浓度为2μg/mL;

              1.3 实验

              1.3.1 样品制备

              1L 自来水中加入100mg硫代硫酸钠,加入200μL的 2μg/mL 微囊藻毒素-LR标准工作液,样品的加标浓度为400ng/L。超声30min,待萃取。使用同一批EmporeTM 固相萃取膜(C1847mm)每个样品进行次重复制备

              1.3.2 净化与浓缩

              将样品及EmporeTM 固相萃取膜(C1847mm)加入Sepaths UP 柱膜通用全自动固相萃取系统,按照图1所示的方法进行Sepaths UP方法编辑进行固相萃取富集,收集洗脱液。

              对洗脱液进行氮吹浓缩,当收集液浓缩到近干时,加入流动相定容到1.0mL,待HPLC检测。



               

              图1 微囊藻毒素-LR SPE富集方法


              1.3.3 HPLC分析

              色谱柱:LabParts C18反相柱,5μm,4.6×250mm;

              波长:238nm;

              流速:1mL/min;

              柱温:35

              进样量:20μL;

              流动相:甲醇:磷酸盐缓冲溶液= 65:35

              2, 实验结果 

               

              图2,微囊藻毒素-LR标准工作液色谱图0.4ppm

               

              3结果与讨论 

              本次实验展示使用EmporeTM 固相萃取膜(C1847mm,固相萃取柱,货号:98-0604-0217-3)对自来水中微囊藻毒素-LR进行富集提取的方法。实验中,样品经固相萃取净化、浓缩等前处理步骤后,经HPLC分析得到微囊藻毒素-LR的加标回收率80.1%~86.4%,结果较好。四次重复实验RSD=3.1%,通道间的平行性良好。实验表明,EmporeTM 固相萃取膜(C1847mm,固相萃取柱,货号:98-0604-0217-3)适用于微囊藻毒素-LR的萃取净化。

               

              4,参考文献

              [1] GB/T 5749-2006 生活饮用水卫生标准

              [2]GB/T 20466-2006 水中微囊藻毒素的测定


              图 3 加标样品色谱图

               

              表1 加标回收率结果

              标样

              4 组平行样回收率,%

              平均值,%

              RSD,%

              1

              2

              3

              4

              微囊藻毒素-LR

              80.1

              82.7

              86.4

              83.3

              83.1

              3.1


               

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